GAD-65 Un Marcador Predictor de Riesgo de Diabetes

Introducción

La prevalencia mundial de la diabetes entre los adultos mayores de 18 años aumentó del 4.7% de 1980 al 8,5% en 2014.  Entre 2000 y 2016 se ha registrado un incremento en el 5% en la mortalidad prematura por diabetes.  La diabetes es la mayor causa de ceguera, insuficiencia renal, infartos, accidente cerebrovascular y amputación de los miembros inferiores

Se estima que en 2016 la diabetes fue la causa directa de 1.6 millones de muertes. Casi la mitad de todas las muertes atribuibles a la hiperglucemia ocurren antes de los 70 años de edad.  La OMS estima que la diabetes fue la séptima causa de mortalidad en 2016.

Existen dos tipos más comunes de diabetes  que son: 

• Diabetes tipo 1: La diabetes tipo 1 es una de las enfermedades crónicas infantiles más frecuentes. Ocurre porque el páncreas no fabrica suficiente cantidad de insulina. Los factores y causas estudiados pueden ser diversos.  El factor genético,  la Autoinmunidad y otro factor como daño ambiental.
•  Diabetes tipo 2: La diabetes tipo 2 es la forma de diabetes más frecuente en personas mayores de 40 años. Se la conoce también como diabetes del adulto, En este tipo de diabetes la capacidad de producir insulina no desaparece pero el cuerpo presenta una resistencia a esta hormona. En este tipo de diabetes si influye el  factor genético y hereditario que es el más común, también tiene que ver los estilos de vida.  El 80% de las personas que desarrollan diabetes tipo 2 tienen obesidad y no tienen una vida muy activa.

Otro tipo de diabetes que se ha estudiado es el tipo LADA ( sigla en inglés de Diabetes Autoinmune Latente en adultos), llamada también Diabetes tipo 1.5, definida como un trastorno autoinmune genético, en la cual el sistema inmunológico de estos pacientes no reconoce, y por lo tanto, ataca las células beta del páncreas, que son las encargadas de producir insulina. En los pacientes que padecen de LADA, este ataque ocurre lenta y progresivamente, presentando características de diabetes tipo 1 y diabetes tipo 2. Contrario a la diabetes tipo 2, que en algunos casos puede prevenirse con dietas y ejercicios, el tipo LADA no hay forma de prevenirla o evitarla, pero si evitar complicaciones.

Importancia en la determinación de la proteína GAD 65 en el  la predicción y diagnóstico de la diabetes autoinmune

GAD es una enzima que cataliza la formación de ácido gamma-aminobutírico (GABA) a partir de glutamina en los tejidos nerviosos y pancreáticos. En los seres humanos existen dos isoenzimas de la GAD que reciben el nombre relacionado a su peso molecular: GAD 65 y GAD67.  

La mayoría de los pacientes diabéticos de tipo 1 (70 – 80 %) tienen autoanticuerpos contra GAD65, que a menudo aparecen años antes de la aparición clínica de la enfermedad, proporcionando un útil marcador predictivo de la progresión de la diabetes autoinmunitaria. La presencia de autoanticuerpos contra GAD65 ha demostrado ser un fuerte marcador predictivo para la aparición eventual de diabetes mellitus insulinodependiente (IDDM, por sus siglas en inglés). La medición de anticuerpos contra GAD65 también se puede utilizar para distinguir pacientes diabéticos dependientes de insulina de pacientes diabéticos no dependientes de insulina cuando la historia clínica no es clara. 

Entre las metodologías existentes para la medición de los Anticuerpos GAD 65 está la  Inmunofluorescencia, ELISA y Quimioluminiscencia. 

La Quimioluminiscencia se ha convertido en el método más adecuado por ser automatizado, de alta sensibilidad y se obtienen resultado en muy corto tiempo.

Prueba MAGLUMI GAD 65  por Quimioluminiscencia 

Principio

La prueba Maglumi GAD65 es un inmunoensayo por quimioluminiscencia tipo sándwich. La muestra (o calibrador/control, si corresponde), el antígeno GAD65 marcado con el sustrato quimioluminiscente ABEI (N-4-Aminobutyl-N-ethylisoluminol) y las microperlas magnéticas recubiertas con antígeno GAD65 purificado se mezclan e incuban a 37 °C, formando complejos anticuerpo-antígeno. Después de la precipitación en un campo magnético, se decanta el sobrenadante y luego se realiza un ciclo de lavado. Luego se agrega antígeno GAD65 marcado con ABEI y se incuba para formar complejos tipo sándwich. Después de la precipitación en un campo magnético, se decanta el sobrenadante y luego se realiza otro ciclo de lavado. Posteriormente, se agregan los iniciadores 1+2 para activar la reacción quimioluminiscente. La señal luminosa se mide en un fotomultiplicador dentro de un tiempo de 3 segundos y se expresa en unidades relativas de luz (RLU, por sus siglas en inglés), que es proporcional a la concentración de GAD65 presente en la muestra (o calibrador/control, si procede). 

Especificaciones de la prueba

• Presentaciones de la prueba : kit por 100 pruebas / 50 pruebas
• Principio: Inmunoensayo tipo Sandwich
• Protocolo:  Ensayo de dos pasos
• Tipo de muestra Suero 
• Intervalo de calibración. Cada 2 semanas
• Volumen de muestra 50 μL
• Rango de medición 1,0 – 280 IU/ml 
• Valor de referencia: <17 IU/ml (percentil 95 de tendencia central). 
• Tiempo de procesamiento de  la prueba 50 min
• Trazabilidad de la calibración:  Primer reactivo de referencia internacional de la OMS 97/550

Bibliografía

1.Towns R, Pietropaolo M,(2011) GAD65 autoantibodies and its role as biomarker of Type 1

diabetes and Latent Autoimmune Diabetes in Adults (LADA). Drugs Future. 2011 November ; 36(11): 847.

Erlander MG, Tillakaratne NJ, Feldblum S, Patel N, Tobin AJ (July 1991). “Two genes encode distinct glutamate decarboxylases”. Neuron. 7 (1): 91–100. 

3. Pinal CS, Tobin AJ (1998). “Uniqueness and redundancy in GABA production”. Perspectives on Developmental Neurobiology. 5 (2–3): 109–18. 

4. Jin H, Wu H, Osterhaus G, Wei J, Davis K, Sha D, Floor E, Hsu CC, Kopke RD, Wu JY (April 2003). “Demonstration of functional coupling between gamma -aminobutyric acid (GABA) synthesis and vesicular GABA transport into synaptic vesicles”. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100 (7): 4293–8. 

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